Emx2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420170

Übersicht

EMX2 (empty spiracles homeobox 2) ist ein Homeodomänen-Transkriptionsfaktor, der während der Embryogenese die regionale Musterbildung und Zellschicksalsentscheidungen steuert und bei der Maus eine wichtige Rolle in der Vorderhirn- und kortikalen Arealisierung sowie in der Urogenital- und Gliedmaßenentwicklung spielt. Er reguliert entwicklungsspezifische Genexpressionsprogramme, indem er an cis-regulatorische Elemente bindet und Netzwerke koordiniert, die mit der Morphogensignalisierung von WNT/β-Catenin, FGF und BMP verknüpft sind, und beeinflusst dadurch Progenitorproliferation, Differenzierung und die Bildung von Gewebegrenzen. Eine veränderte Emx2-Dosierung oder regulatorische Aktivität wurde mit neuroentwicklungsbedingten Auffälligkeiten und strukturellen Fehlbildungen in Verbindung gebracht; zudem wurde eine fehlregulierte EMX2-Expression in mehreren Tumorkontexten als Marker aberranter Differenzierungszustände beschrieben. Diese Eigenschaften machen Emx2 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung der transkriptionellen Kontrolle von Entwicklungswegen und der Lineagespezifikation.

Das Emx2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Emx2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Emx2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Emx2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Emx2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Emx2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Emx2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Emx2-Exone abzielen, die für die Emx2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Emx2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Emx2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Emx2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Emx2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Emx2 HDR-Plasmid (m) und Emx2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Emx2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Emx2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.