Plasmide Double Nickase (h) Emt: sc-402628-NIC

L’ITK humain (IL2-inducible T-cell kinase) code une tyrosine kinase non réceptrice de la famille Tec qui propage la signalisation en aval du récepteur des cellules T, des récepteurs co-stimulateurs et des signaux de chimiokines, afin de façonner l’activation, la différenciation et la production de cytokines des lymphocytes T. ITK intègre des événements de phosphorylation proximaux avec l’activation de PLCγ1, les flux calciques, la signalisation MAPK et des programmes transcriptionnels dépendants de NFAT/NF-κB/AP-1, influençant la formation de la synapse immunologique et le remodelage du cytosquelette. Une signalisation ITK dérégulée a été associée à une polarisation Th2/Th17 altérée, à une immunité antivirale diminuée et à des états d’activation lymphocytaire aberrants, pertinents pour la biologie des immunodéficiences et des maladies lymphoprolifératives. En tant que nœud de voie reliant la reconnaissance antigénique aux sorties transcriptionnelles, ITK est fréquemment étudiée dans les réseaux de signalisation immunitaire, les décisions de lignée des cellules T et les interactions croisées de la signalisation inflammatoire.

Emt Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ITK dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ITK. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ITK. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ITK.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.