Plásmido CRISPR de Activación (h) EMR1: sc-400698-ACT

ADGRE1 codifica EMR1, un receptor de adhesión acoplado a proteína G de la familia EGF-TM7, asociado predominantemente a la biología del linaje mieloide. EMR1 participa en interacciones célula–célula y en procesos de vigilancia inmunitaria, integrando señales extracelulares con vías de señalización vinculadas a GPCR que influyen en la activación de leucocitos, la residencia tisular y las respuestas inflamatorias. Su perfil de expresión se utiliza ampliamente para estudiar fenotipos asociados a macrófagos y eosinófilos, incluida la regulación de redes de citocinas y programas de activación de la inmunidad innata. La desregulación de la señalización mieloide y los estados alterados de adhesión/activación ligados a EMR1 son relevantes para la investigación sobre inflamación crónica, microambientes inmunitarios asociados a tumores y remodelación tisular mediada por el sistema inmunitario.

EMR1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ADGRE1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EMR1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ADGRE1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ADGRE1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EMR1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ADGRE1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EMR1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EMR1 en células tumorales con expresión de ADGRE1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.