Plasmide Double Nickase (h) EMP-3: sc-407036-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) EMP-3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide EMP-3 Double Nickase (h) et le plasmide EMP-3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant EMP3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: EMP-3 Antibody (SW-5): sc-81797
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) EMP-3 | sc-407036-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) EMP-3 | sc-407036-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EMP3 code la protéine membranaire épithéliale 3 (EMP-3), une glycoprotéine membranaire de type tétraspanine impliquée dans la régulation des interactions cellule–cellule, l’organisation de la membrane et la signalisation au niveau de la membrane plasmique. Dans les cellules humaines, EMP-3 a été associée à la modulation de voies dépendantes de récepteurs, notamment les voies EGFR/PI3K–AKT et MAPK, influençant la prolifération, la survie et les comportements migratoires. Des variations d’expression et des altérations génomiques d’EMP3 ont été rapportées dans de nombreux types de tumeurs ainsi que dans des contextes neurologiques, la reliant à des processus tels que la différenciation, l’invasion et les réponses au microenvironnement. En tant que facteur associé à la surface cellulaire, EMP-3 est fréquemment étudiée pour son impact sur la dynamique de signalisation, le trafic intracellulaire et les programmes transcriptionnels en aval pertinents pour la biologie des maladies.
EMP-3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EMP3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EMP3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EMP3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EMP3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.