Plasmide CRISPR/Cas9 KO EMP-3 (h): sc-407036

Présentation

EMP3 code la protéine membranaire épithéliale 3 (EMP-3), une protéine membranaire de type tétraspanine impliquée dans la régulation de l’adhésion cellulaire, de l’organisation membranaire et de la transduction du signal à la surface cellulaire. Dans les cellules humaines, EMP-3 a été associée à la modulation de voies impliquées dans la prolifération et les réponses au stress, notamment la signalisation associée aux récepteurs et, selon le contexte cellulaire, des composants en aval des réseaux MAPK/PI3K. Des profils d’expression altérés d’EMP3 ont été rapportés dans de multiples types de tumeurs ainsi que dans des études liées à des maladies neurologiques, ce qui étaye son utilisation comme variable moléculaire dans des modèles de signalisation oncogénique, d’invasion et de différenciation. En tant que facteur associé à la membrane, EMP-3 est également pertinente pour analyser les modifications des interactions cellule–cellule et des réponses au microenvironnement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO EMP-3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène EMP3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du EMP3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert EMP3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine EMP-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en EMP3 pour l'étude de la signalisation de EMP-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de EMP3 essentiels à la fonction de EMP-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de EMP3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le EMP-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le EMP-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus EMP3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le EMP-3 plasmide HDR (h) et le EMP-3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie EMP3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles EMP3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.