Plasmide CRISPR d'Activation (h) EMP-3: sc-407036-ACT

La protéine membranaire épithéliale 3 (EMP3) est une protéine associée à la membrane, de type tétraspan, impliquée dans la régulation des interactions cellule–cellule, de l’organisation membranaire et des programmes de transduction du signal qui façonnent la prolifération, la différenciation et les réponses au stress. Dans les cellules humaines, EMP3 a été associée à la modulation de la signalisation des récepteurs à activité tyrosine kinase, du trafic endosomal et de la dynamique du cytosquelette, influençant des processus tels que l’adhérence et la migration. Des altérations de l’expression d’EMP3 ainsi que des profils de méthylation de son promoteur ont été rapportées dans de multiples contextes tumoraux, où le statut d’EMP3 est fréquemment étudié en lien avec la plasticité des états cellulaires et la signalisation associée au microenvironnement tumoral. Ces caractéristiques font d’EMP3 un nœud utile pour disséquer les circuits de signalisation proximaux à la membrane et les programmes transcriptionnels pertinents pour la biologie des maladies.

EMP-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de EMP3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

EMP-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus EMP3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription EMP3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de EMP-3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus EMP3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de EMP-3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie EMP-3 dans les cellules tumorales présentant une expression de EMP3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.