Plasmide CRISPR d'Activation (h) EMP-1: sc-403122-ACT

La protéine de membrane épithéliale 1 (EMP1 ; EMP-1) est une glycoprotéine associée à la membrane, à quatre passages transmembranaires, impliquée dans la différenciation épithéliale, la régulation des contacts cellule–cellule et le remodelage des voies de signalisation liées à l’adhésion. Dans les tissus humains, l’expression d’EMP1 a été associée à la modulation des phénotypes prolifératifs et migratoires via des voies qui recoupent la signalisation des récepteurs à activité tyrosine kinase, l’activité MAPK/ERK et l’organisation du cytosquelette. Des niveaux altérés d’EMP1 ont été rapportés dans de nombreux types tumoraux et contextes inflammatoires, où ils sont associés à des modifications de l’invasion, de programmes liés à la TEM (transition épithélio-mésenchymateuse) et des réponses du microenvironnement. Ces caractéristiques font d’EMP1 une cible utile pour disséquer les réseaux de signalisation proximaux à la membrane, les programmes transcriptionnels d’adaptation au stress et les changements de phénotype dans des modèles cellulaires pertinents pour la maladie.

EMP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de EMP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

EMP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus EMP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription EMP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de EMP-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus EMP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de EMP-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie EMP-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de EMP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.