Plasmide CRISPR/Cas9 KO EMBP (m): sc-422395

Présentation

Prg2 code la protéine basique majeure des éosinophiles (EMBP), une protéine granulaire fortement cationique exprimée dans les éosinophiles, qui contribue aux fonctions effectrices de l’immunité innée au niveau des muqueuses et des sites inflammatoires. Lors de la dégranulation, l’EMBP peut se lier aux membranes chargées négativement et à des composants de la matrice extracellulaire, influençant l’intégrité de la barrière épithéliale, les réponses cytotoxiques et le remodelage tissulaire. L’activité de l’EMBP recoupe des voies impliquées dans l’activation des éosinophiles, le recrutement leucocytaire et la signalisation inflammatoire, faisant de Prg2 un marqueur utile et un nœud mécanistique dans les modèles d’inflammation allergique et de maladies des voies aériennes. Dans les systèmes murins, la perturbation de Prg2 aide à disséquer l’immunopathologie induite par les éosinophiles et les interactions hôte–tissu pertinentes pour des phénotypes inflammatoires chroniques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO EMBP (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Prg2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Prg2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Prg2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine EMBP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Prg2 pour l'étude de la signalisation de EMBP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Prg2 essentiels à la fonction de EMBP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Prg2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le EMBP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le EMBP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Prg2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le EMBP plasmide HDR (m) et le EMBP (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Prg2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Prg2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.