Plasmide CRISPR/Cas9 KO ELL (m): sc-420159

Présentation

Ell code ELL, un facteur d’élongation de l’ARN polymérase II qui favorise une transcription processive en limitant les pauses de la polymérase et en soutenant une synthèse productive d’ARNm. ELL participe à des complexes régulateurs de la transcription qui coordonnent l’élongation avec le contexte de la chromatine et la maturation des ARN, influençant ainsi des programmes d’expression génique liés à l’identité cellulaire et à la prolifération. La perturbation de l’élongation dépendante d’ELL peut altérer la fidélité transcriptionnelle et les voies de réponse au stress, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier les mécanismes à l’origine de la dérégulation de l’expression génique dans des réseaux transcriptionnels associés au cancer. Dans des modèles murins, Ell constitue un point d’entrée pratique pour étudier le contrôle de l’élongation au cours du développement, la régulation hématopoïétique et la dynamique transcriptionnelle à l’échelle du génome.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ELL (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ell dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ell, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ell à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ELL.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ell pour l'étude de la signalisation de ELL, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ell essentiels à la fonction de ELL
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ell pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ELL plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ELL plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ell. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ELL plasmide HDR (m) et le ELL (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ell pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ell définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.