Plasmide CRISPR d'Activation (h) ELFN1: sc-405274-ACT

ELFN1 (extracellular leucine-rich repeat and fibronectin type III domain containing 1) code une protéine postsynaptique de type molécule d’adhérence cellulaire, enrichie dans le système nerveux, qui contribue à spécifier l’appariement des partenaires synaptiques et à moduler la neurotransmission. ELFN1 influence l’organisation trans-synaptique et la probabilité de libération présynaptique, participant à la formation et à l’ajustement fonctionnel de microcircuits inhibiteurs définis. Par ses interactions au niveau de la fente synaptique, elle est liée à des voies qui régissent le développement des synapses, la connectivité neuronale et la plasticité dépendante de l’activité. Des altérations de l’expression d’ELFN1 ou des variations de sa régulation ont été associées, dans des études génétiques et d’expression, à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, ce qui étaye sa pertinence pour la recherche en neurosciences mécanistiques et la modélisation des maladies.

ELFN1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ELFN1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ELFN1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ELFN1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ELFN1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ELFN1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ELFN1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ELFN1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ELFN1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ELFN1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.