Plásmido Doble Nickase (m) eIF3ζ: sc-424946-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)eIF3ζ consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa eIF3ζ (m) y el plásmido de doble nickasa eIF3ζ (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Eif3d. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: eIF3ζ Anticuerpo (H-7): sc-271515
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) eIF3ζ | sc-424946-NIC | 20 µg | $410.00 |
Eif3d codifica la subunidad zeta del factor eucariota de iniciación de la traducción 3 del ratón (eIF3ζ), un componente del complejo multiproteico eIF3 que coordina el ensamblaje del complejo de preiniciación 43S y favorece una traducción eficiente de ARNm dependiente del caperuzón. Al regular la eficiencia de iniciación y la selección de ARNm, eIF3ζ influye en la homeostasis del proteoma y se integra con vías de señalización que controlan el crecimiento, la adaptación al estrés y la progresión del ciclo celular, incluida la regulación traduccional mediada por mTOR. La alteración de los factores de iniciación de la traducción se asocia con frecuencia a cambios en la proliferación y en la aptitud celular, lo que convierte a Eif3d en un locus útil para estudiar programas desregulados de síntesis proteica en contextos relevantes para enfermedades.
eIF3ζ El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Eif3d en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Eif3d. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Eif3d. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Eif3d alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.