Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
eIF3η Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400817
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- eIF3η El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico eIF3η, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: eIF3η Anticuerpo (C-5): sc-137214
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
eIF3η Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400817 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
EIF3B codifica una subunidad central del complejo del factor de iniciación de la traducción eucariótico 3 (eIF3), eIF3η, que coordina el reclutamiento de la subunidad ribosomal 40S y el ensamblaje del complejo de preiniciación durante la traducción dependiente de cap. Mediante interacciones con otros factores de iniciación y con el ARNm, eIF3η favorece la selección del codón de inicio y regula la eficiencia de traducción de transcritos vinculados con el crecimiento, el metabolismo y la adaptación al estrés. La función de EIF3B se entrecruza con vías que regulan la proteostasis y la progresión del ciclo celular, y la iniciación de la traducción desregulada se asocia con frecuencia a señales oncogénicas y a cambios en la aptitud celular. Como nodo central del control translacional, EIF3B se estudia habitualmente en contextos de proliferación, respuestas al estrés y cambios asociados a la transformación en los programas de síntesis de proteínas.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO eIF3η (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen EIF3B en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del EIF3B junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de EIF3B tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína eIF3η.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en EIF3B para la investigación de la señalización de eIF3η, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de EIF3B críticos para la función de eIF3η
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de EIF3B para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido eIF3η CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido eIF3η CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus EIF3B. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR eIF3η (h) y el plásmido HDR eIF3η (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología EIF3B para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana EIF3B definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.