Plásmido Doble Nickase (h) eIF2C: sc-400813-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)eIF2C consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa eIF2C (h) y el plásmido de doble nickasa eIF2C (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a AGO2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: eIF2C Anticuerpo (B-3): sc-376696
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) eIF2C | sc-400813-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) eIF2C | sc-400813-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano AGO2 (eIF2C2) codifica Argonauta 2, el núcleo catalítico del complejo de silenciamiento inducido por ARN (RISC), que se une a pequeños ARN y dirige la regulación génica postranscripcional específica de secuencia. AGO2 media la actividad endonucleolítica tipo “slicer” para determinadas dianas de siRNA y miRNA, contribuyendo al corte de ARNm, la represión de la traducción y la degradación del ARNm. A través de estas funciones, modula vías que controlan la proliferación, la diferenciación, las respuestas antivirales innatas y programas adaptativos al estrés. La expresión desregulada de AGO2 o la actividad de RISC se ha vinculado con alteraciones en redes de miRNA observadas en múltiples cánceres y trastornos neurológicos, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico para estudiar el silenciamiento de ARN y los circuitos de regulación génica.
eIF2C El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus AGO2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de AGO2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de AGO2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con AGO2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.