Plasmide CRISPR d'Activation (m) EID-1: sc-425516-ACT

La protéine EID-1 murine (Eid1) est un régulateur de la différenciation interagissant avec EP300/CBP, qui agit comme modulateur transcriptionnel à l’interface du remodelage de la chromatine et du contrôle du cycle cellulaire. EID-1 a été associée à la régulation de la transcription dépendante de RB/E2F et des programmes de différenciation, influençant la capacité proliférative et l’engagement de lignée dans les tissus en développement comme chez l’adulte. Par ses interactions avec des co‑régulateurs transcriptionnels, elle peut façonner des réseaux d’expression génique impliqués dans l’arrêt de croissance, les réponses au stress et l’homéostasie tissulaire. Un contrôle transcriptionnel associé à EID1 dérégulé est pertinent pour l’étude d’états prolifératifs et de différenciation anormaux, notamment dans des contextes modélisant une signalisation oncogénique et des phénotypes du développement.

EID-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Eid1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

EID-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Eid1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Eid1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de EID-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Eid1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de EID-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie EID-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Eid1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.