Plásmido Doble Nickase (h) Egr-2: sc-401203-NIC

EGR2 codifica Egr-2, un factor de transcripción con dedos de zinc que se induce rápidamente por señales extracelulares para programar decisiones de destino celular y respuestas transcripcionales a largo plazo. En células humanas, Egr-2 regula redes génicas implicadas en el desarrollo y la mielinización de los nervios periféricos, la diferenciación y la tolerancia de células inmunitarias, y la remodelación transcripcional dependiente de la actividad. Se integra con la señalización de genes de respuesta inmediata impulsada por MAPK/ERK y modula la cromatina y la ocupación de promotores en dianas específicas de linaje. La actividad desregulada de EGR2 y los programas transcripcionales descendentes alterados se han asociado con neuropatías hereditarias y adquiridas, así como con disfunción inmunitaria, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos de la regulación génica neuroinmunitaria.

Egr-2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EGR2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EGR2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EGR2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EGR2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.