Particules Lentivirales d'Activation (m) EGFR: sc-420131-LAC

Le gène murin *Egfr* code le récepteur du facteur de croissance épidermique (EGFR), une tyrosine kinase réceptrice qui régule la prolifération, la survie, la migration et la différenciation via la dimérisation induite par le ligand et l’autophosphorylation. EGFR transmet ses signaux par les voies canoniques MAPK/ERK, PI3K–AKT–mTOR, JAK/STAT et PLCγ–PKC, coordonnant la progression du cycle cellulaire et les réponses au stress. Dans des modèles murins, une activité EGFR altérée perturbe l’homéostasie épithéliale et les programmes de développement, et est largement utilisée pour étudier une signalisation de croissance dérégulée, pertinente pour la transformation oncogénique et le remodelage tissulaire. Les réseaux dépendants d’EGFR interfèrent également avec le trafic endocytique, l’inhibition par rétrocontrôle et le dialogue avec d’autres RTK, faisant d’*Egfr* un nœud clé pour la cartographie des voies de signalisation.

Les particules d'activation lentivirales EGFR (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Egfr dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales EGFR (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Egfr, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de EGFR. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Egfr ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.