Plasmide Double Nickase (m) EFR3A: sc-429403-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) EFR3A correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide EFR3A Double Nickase (m) et le plasmide EFR3A Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Efr3a. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) EFR3A | sc-429403-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) EFR3A | sc-429403-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin *Efr3a* code EFR3A, une protéine d’échafaudage conservée associée à la membrane plasmique, qui aide à recruter l’activité de la phosphatidylinositol 4‑kinase à la surface cellulaire, soutenant l’homéostasie des phosphoinositides et la signalisation en aval. En régulant le PI4P et les pools de phosphoinositides apparentés, EFR3A influence le trafic membranaire, la signalisation des récepteurs et les processus dépendants de l’actine qui façonnent la polarité et l’adhérence cellulaires. Cette voie est centrale pour le contrôle dynamique de l’identité membranaire et des réseaux de signalisation dépendants des phosphoinositides, largement utilisés dans les tissus, y compris le système nerveux. Les perturbations du métabolisme des phosphoinositides sont impliquées dans de nombreux troubles, faisant d’*Efr3a* une cible utile pour des études mécanistiques de la signalisation membranaire et de l’organisation cellulaire dans des modèles murins.
EFR3A Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Efr3a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Efr3a. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Efr3a. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Efr3a.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.