Plasmide Double Nickase (h) ECM29: sc-409848-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ECM29 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ECM29 Double Nickase (h) et le plasmide ECM29 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant KIAA0368. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ECM29 | sc-409848-NIC | 20 µg | $410.00 |
KIAA0368 code ECM29, une grande protéine d’échafaudage associée au protéasome 26S, qui contribue à coordonner l’assemblage, la localisation et le contrôle qualité du protéasome. En modulant la dynamique du protéasome, ECM29 influence le renouvellement des protéines dépendant de l’ubiquitine et s’inscrit dans des voies de protéostasie qui régissent la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et la signalisation du stress. Une régulation altérée du protéasome a été associée à une dégradation dérégulée de protéines clés de signalisation ainsi qu’à des perturbations plus larges de l’homéostasie cellulaire, pertinentes pour la biologie du cancer et la recherche sur la neurodégénérescence. Par conséquent, ECM29 est fréquemment étudiée dans des contextes où la fonction du protéasome, l’ubiquitination et l’adaptation cellulaire au stress constituent des variables expérimentales centrales.
ECM29 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KIAA0368 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KIAA0368. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KIAA0368. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KIAA0368.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.