Plásmido CRISPR de Activación (h) ECH1: sc-406076-ACT

ECH1 (enoil-CoA hidratasa 1) es una enzima mitocondrial que cataliza un paso de hidratación en la β-oxidación de los ácidos grasos y participa en el catabolismo de intermediarios acil-CoA de cadena ramificada e insaturados. Al favorecer el uso mitocondrial de lípidos y el suministro de acetil-CoA, ECH1 contribuye a la homeostasis energética celular y se vincula con programas metabólicos más amplios que se entrecruzan con el equilibrio redox y la función mitocondrial. Las alteraciones en la oxidación de ácidos grasos y la reprogramación metabólica mitocondrial son características recurrentes de los trastornos metabólicos y de la biología del cáncer, lo que convierte a ECH1 en un nodo útil para estudiar cómo el flujo de lípidos influye en el crecimiento celular, la adaptación al estrés y la señalización metabólica. ECH1 también es relevante para investigar la comunicación entre peroxisomas y mitocondrias y el manejo de intermediarios de ácidos grasos potencialmente tóxicos.

ECH1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ECH1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ECH1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ECH1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ECH1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ECH1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ECH1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ECH1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ECH1 en células tumorales con expresión de ECH1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.