Plasmide CRISPR d'Activation (h) EBF1: sc-401258-ACT

EBF1 (early B-cell factor 1) est un facteur de transcription déterminant de la lignée, qui régule l’accessibilité de la chromatine et les programmes d’expression génique nécessaires à l’engagement dans la lignée B, à la différenciation et à l’homéostasie du système immunitaire. Dans les cellules hématopoïétiques, EBF1 coopère avec des facteurs tels que PAX5 et E2A pour coordonner des réseaux transcriptionnels contrôlant la recombinaison V(D)J, la compétence de signalisation du récepteur des cellules B et la survie. Au-delà de la lymphopoïèse, EBF1 joue des rôles dans l’adipogenèse et le développement neuronal via un contrôle transcriptionnel dépendant du contexte. Une expression ou une fonction dérégulée d’EBF1 a été associée à une altération du développement des cellules B et à des états transcriptionnels modifiés observés dans la biologie des maladies hématologiques.

EBF1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de EBF1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

EBF1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus EBF1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription EBF1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de EBF1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus EBF1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de EBF1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie EBF1 dans les cellules tumorales présentant une expression de EBF1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.