Plásmido CRISPR de Activación (h) EB1: sc-401367-ACT

El gen humano MAPRE1 codifica la proteína de unión al extremo (end-binding) 1 (EB1), un factor central de seguimiento del extremo plus de los microtúbulos que coordina la dinámica de los microtúbulos con la captura cortical, el ensamblaje del huso mitótico y la segregación cromosómica. EB1 interactúa con APC y otras proteínas +TIP para regular el crecimiento de los microtúbulos, la polaridad celular y el tráfico intracelular, vinculando la remodelación del citoesqueleto con el control del ciclo celular. La desregulación de MAPRE1/EB1 se ha asociado con alteraciones en la fidelidad mitótica, aneuploidía y comportamiento celular invasivo, lo que la hace relevante para estudiar las vías subyacentes a fenotipos proliferativos y migratorios. Su papel central en procesos dependientes de microtúbulos también respalda la investigación mecanística sobre la función del centrosoma y la regulación del punto de control del huso.

EB1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MAPRE1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EB1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MAPRE1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MAPRE1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EB1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MAPRE1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EB1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EB1 en células tumorales con expresión de MAPRE1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.