E-Selectin/CD62E/SELE Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400452-ACT

SELE codifica a E-selectina (CD62E), uma molécula de adesão induzível de células endoteliais que é rapidamente aumentada por citocinas inflamatórias como TNF-α e IL-1β por meio de sinalização dependente de NF-κB e MAPK. A E-selectina de superfície medeia o contato inicial, a captura e o rolamento de leucócitos sobre o endotélio ativado ao se ligar a ligantes sialilados e fucosilados, coordenando a extravasação leucocitária durante a inflamação aguda e crônica. Essa cascata de adesão se cruza com programas de ativação vascular que influenciam a permeabilidade endotelial, a apresentação de citocinas/quimiocinas e a adesão firme subsequente mediada por integrinas. A expressão desregulada de SELE é frequentemente estudada em modelos de inflamação vascular e disfunção endotelial relevantes para aterosclerose, lesão por isquemia-reperfusão, inflamação autoimune e angiogênese associada a tumores.

E-Selectin/CD62E/SELE O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SELE sem alterar a sequência de ADN subjacente.

E-Selectin/CD62E/SELE O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SELE em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SELE, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de E-Selectin/CD62E/SELE. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SELE nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de E-Selectin/CD62E/SELE no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via E-Selectin/CD62E/SELE em células tumorais com expressão de SELE silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.