Plasmide CRISPR/Cas9 KO E-cadherin (canine): sc-437341

Présentation

L’E-cadhérine (CDH1) est une glycoprotéine d’adhésion intercellulaire dépendante du calcium, qui participe à la formation des jonctions d’adhérence et au maintien de l’intégrité des tissus épithéliaux dans les cellules canines. Par son association cytoplasmique avec les caténines, l’E-cadhérine se relie au cytosquelette d’actine et régule la polarité épithéliale, l’inhibition de contact et la fonction de barrière. La perte ou la dérégulation de l’E-cadhérine perturbe la signalisation jonctionnelle et peut favoriser des programmes de transition épithélio-mésenchymateuse (TEM), avec des effets en aval sur la signalisation Wnt/β-caténine, ainsi que sur des phénotypes liés à la migration et à l’invasion. Des altérations de l’expression de l’E-cadhérine et de l’architecture des jonctions sont fréquemment étudiées dans le contexte de la progression tumorale, de la fibrose et du remodelage inflammatoire des tissus épithéliaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO E-cadherin (canine) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène dans les lignées cellulaires canine. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du , ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine E-cadherin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en pour l'étude de la signalisation de E-cadherin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de essentiels à la fonction de E-cadherin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le E-cadherin plasmide CRISPR/Cas9 KO (canine) et le E-cadherin plasmide CRISPR/Cas9 KO (canine2) ciblent des sites distincts au sein du locus . Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le E-cadherin plasmide HDR (canine) et le E-cadherin (canine2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.