Particules Lentivirales d'Activation (m) dystrophin: sc-420021-LAC

Le gène murin **Dmd** code la dystrophine, une grande protéine du cytosquelette qui relie la F-actine au complexe dystrophine–glycoprotéines au niveau du sarcolemme, stabilisant les membranes des myofibres pendant la contraction et organisant les costamères. La dystrophine soutient la mécanotransduction et l’intégrité membranaire, influençant l’homéostasie du calcium, la signalisation par l’oxyde nitrique et les programmes de régénération musculaire. La perte ou la diminution de la dystrophine perturbe le complexe protéique associé à la dystrophine, entraînant une fragilité du sarcolemme, une inflammation et l’activation de voies de remodelage, largement utilisées pour modéliser la biologie des dystrophies musculaires de Duchenne/Becker dans des systèmes murins. **Dmd** est donc au cœur des études sur l’homéostasie des muscles squelettiques et cardiaques, les réponses au stress et la régulation génique dans le muscle strié.

Les particules d'activation lentivirales dystrophin (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Dmd dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales dystrophin (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Dmd, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de dystrophin. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Dmd ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.