Plasmide CRISPR/Cas9 KO dystrophin (porcine): sc-437292

Présentation

La dystrophine est une grande protéine du cytosquelette qui relie le réseau d’actine intracellulaire au complexe de glycoprotéines associé à la dystrophine au niveau du sarcolemme, stabilisant ainsi les fibres musculaires lors de la contraction. Elle contribue à l’intégrité membranaire et à la mécanotransduction dans les muscles squelettiques et cardiaques, et influence des processus de signalisation coordonnant la gestion du calcium, la signalisation du monoxyde d’azote et les réponses au stress cellulaire. L’altération de la dystrophine compromet la résistance du sarcolemme, entraînant des lésions des myofibres, une inflammation et un remodelage progressif, ce qui en fait un point d’entrée moléculaire largement utilisé pour étudier les mécanismes des dystrophies musculaires. Dans les systèmes porcins, la biologie de la dystrophine est exploitée pour modéliser le développement musculaire, l’architecture et des voies pertinentes pour la maladie dans un contexte de grand animal.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO dystrophin (porcine) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène dans les lignées cellulaires porcine. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du , ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine dystrophin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en pour l'étude de la signalisation de dystrophin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de essentiels à la fonction de dystrophin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le dystrophin plasmide CRISPR/Cas9 KO (porcine) et le dystrophin plasmide CRISPR/Cas9 KO (porcine2) ciblent des sites distincts au sein du locus . Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le dystrophin plasmide HDR (porcine) et le dystrophin (porcine2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.