Plásmido Doble Nickase (h) Dyrk1A: sc-401928-NIC

DYRK1A codifica la quinasa 1A regulada por fosforilación de tirosina de doble especificidad (Dyrk1A), una quinasa de serina/treonina que sufre autofosforilación y modula redes de fosforilación que controlan la progresión del ciclo celular, la diferenciación neuronal y la estabilidad proteica. Dyrk1A influye en programas transcripcionales y cascadas de señalización mediante la fosforilación de sustratos implicados en la regulación de la cromatina, el procesamiento de ARN y la proteostasis, lo que la vincula con vías de desarrollo y de respuesta al estrés. En biología humana, las alteraciones en la dosis y la actividad de DYRK1A se han asociado con fenotipos del neurodesarrollo y con redes génicas sensibles a la dosis, y la desregulación de sus salidas de señalización se ha estudiado en el contexto de procesos proliferativos y sinápticos. Estas características hacen de DYRK1A un nodo estudiado con frecuencia para desentrañar el control dependiente de quinasas sobre la expresión génica y las decisiones de destino celular.

Dyrk1A El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DYRK1A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DYRK1A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DYRK1A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DYRK1A alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.