Plasmide Double Nickase (h) Dyrk1A: sc-401928-NIC

DYRK1A code la kinase 1A à double spécificité régulée par phosphorylation sur tyrosine (Dyrk1A), une kinase sérine/thréonine qui s’autophosphoryle et module des réseaux de phosphorylation contrôlant la progression du cycle cellulaire, la différenciation neuronale et la stabilité des protéines. Dyrk1A influence des programmes transcriptionnels et des cascades de signalisation via la phosphorylation de substrats impliqués dans la régulation de la chromatine, le traitement des ARN et la protéostasie, ce qui la relie à des voies du développement et de réponse au stress. En biologie humaine, des variations de dosage et d’activité de DYRK1A ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et à des réseaux de gènes sensibles au dosage, et la dérégulation de ses sorties de signalisation a été étudiée dans le contexte de processus prolifératifs et synaptiques. Ces caractéristiques font de DYRK1A une cible fréquemment étudiée pour disséquer le contrôle, dépendant des kinases, de l’expression génique et des décisions de destin cellulaire.

Dyrk1A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DYRK1A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DYRK1A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DYRK1A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DYRK1A.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.