Plásmido CRISPR de Activación (h) Dyrk1A: sc-401928-ACT

DYRK1A codifica la quinasa 1A regulada por fosforilación de tirosina de doble especificidad (Dyrk1A), una quinasa de serina/treonina que modula programas de fosforilación de proteínas que gobiernan la progresión del ciclo celular, la diferenciación neuronal y la función sináptica. Dyrk1A se integra en redes de señalización que controlan la regulación transcripcional, el empalme del ARN (splicing) y la proteostasis, con sustratos descritos y conexiones con vías que influyen en el estado de la cromatina y en las respuestas al estrés. Las alteraciones en la dosis y la actividad de DYRK1A se han implicado en fenotipos del neurodesarrollo, incluidos efectos sensibles a la dosis asociados con el síndrome de Down y con biología relacionada con el trastorno del espectro autista, y también se han estudiado en contextos de proliferación de células cancerosas. Estas características convierten a DYRK1A en un nodo útil para diseccionar circuitos reguladores impulsados por quinasas en modelos celulares humanos.

Dyrk1A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DYRK1A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Dyrk1A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DYRK1A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DYRK1A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Dyrk1A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DYRK1A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Dyrk1A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Dyrk1A en células tumorales con expresión de DYRK1A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.