Dvl-3/Dishevelled 3/DVL3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401041-ACT

DVL3 kodiert Dishevelled 3 (Dvl-3), ein zytoplasmatisches Scaffold-Protein, das Signale von Wnt-Liganden an nachgeschaltete Effektoren weiterleitet, um Zellpolarität, Migration und Schicksalsfestlegung zu koordinieren. Über Interaktionen mit Frizzled-Rezeptoren und zentralen Wnt-Komponenten trägt Dvl-3 dazu bei, das Gleichgewicht zwischen kanonischer, β‑Catenin‑abhängiger Transkription und nicht-kanonischen Outputs der planaren Zellpolarität sowie der Wnt/Ca²⁺-Signalgebung zu steuern. DVL3-abhängige Signalwege beeinflussen den Umbau des Zytoskeletts, den vesikulären Transport und die Orientierung der mitotischen Spindel und verknüpfen das Protein damit mit Entwicklungs-Musterbildung und Gewebehomöostase. Eine fehlregulierte Wnt–Dishevelled-Aktivität, einschließlich veränderter DVL3-Expression oder einer Umverdrahtung des Signalwegs, wird häufig in Kontexten wie Tumorbiologie, Invasivität und aberranten Differenzierungsprogrammen untersucht.

Dvl-3/Dishevelled 3/DVL3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen DVL3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Dvl-3/Dishevelled 3/DVL3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des DVL3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der DVL3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Dvl-3/Dishevelled 3/DVL3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native DVL3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Dvl-3/Dishevelled 3/DVL3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Dvl-3/Dishevelled 3/DVL3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem DVL3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.