Plásmido CRISPR de Activación (m) Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2: sc-420081-ACT

El gen murino Dvl2 codifica Dishevelled 2 (DVL2), una proteína andamiaje citoplasmática que transduce señales Wnt hacia efectores aguas abajo tanto en la vía canónica dependiente de β-catenina (transcripción) como en las vías no canónicas de polaridad planar celular y Wnt/Ca2+. Al acoplar las entradas de los receptores Frizzled/LRP con componentes de la vía como Axin, GSK3 y pequeñas GTPasas, DVL2 influye en la especificación del destino celular, la polaridad, la migración y la organización del citoesqueleto durante el desarrollo y la homeostasis tisular. La desregulación de la señalización Wnt–DVL2 se ha implicado en programas aberrantes de proliferación y diferenciación, lo que convierte a Dvl2 en un foco frecuente de estudios sobre redes de señalización oncogénica y trastornos del desarrollo. Su papel central como adaptador también favorece la investigación de la intercomunicación de la vía con MAPK, PI3K/AKT y procesos de remodelación del citoesqueleto en fenotipos celulares relevantes para la enfermedad.

Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Dvl2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Dvl2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Dvl2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Dvl2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 en células tumorales con expresión de Dvl2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.