Plasmide Double Nickase (h) DTWD1: sc-416659-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) DTWD1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DTWD1 Double Nickase (h) et le plasmide DTWD1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant DTWD1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: DTWD1 Antibody (E-5): sc-398408
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) DTWD1 | sc-416659-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) DTWD1 | sc-416659-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DTWD1 code une protéine conservée contenant un domaine DTW, impliquée dans le métabolisme de l’ARN, avec des rôles proposés dans la modification des ARNt et, plus largement, dans des processus de modification de l’ARN susceptibles d’influencer la fidélité de la traduction et la protéostasie. Bien que DTWD1 ne soit pas entièrement caractérisée, les protéines à domaine DTW sont couramment associées à des activités de modification des nucléotides et à la coordination de voies de traitement de l’ARN dans le cytoplasme et le noyau. La perturbation de la modification de l’ARN et du contrôle de la traduction peut remodeler la progression du cycle cellulaire et la signalisation de réponse au stress, ce qui rend DTWD1 pertinente pour des études sur la régulation de l’expression génique et l’homéostasie cellulaire. Une expression altérée de DTWD1 a été rapportée dans des jeux de données transcriptomiques dans de multiples contextes pathologiques, ce qui étaye son utilisation comme gène candidat dans des investigations de génomique mécanistique.
DTWD1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DTWD1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DTWD1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DTWD1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DTWD1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.