Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
dsg3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401809
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- dsg3 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico dsg3, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: dsg3 Anticuerpo (5H10): sc-23912
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
dsg3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401809 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
DSG3 codifica la desmogleína-3, una cadherina desmosómica que media la adhesión célula–célula dependiente de calcio en epitelios estratificados y mantiene la integridad tisular bajo estrés mecánico. DSG3 interactúa con la desmoplaquina y la plakoglobina para anclar los filamentos intermedios y coordinar la organización de las uniones, vinculando el ensamblaje de desmosomas con la remodelación del citoesqueleto y los programas de diferenciación epitelial. A través de su papel en la señalización dependiente de la adhesión, DSG3 influye en procesos como la formación de la barrera, la polaridad celular y la migración colectiva. La expresión alterada de DSG3 o el reconocimiento por autoanticuerpos dirigidos contra la desmogleína-3 se han asociado con fragilidad epitelial y fenotipos de ampollas, y los componentes desmosómicos desregulados se estudian con frecuencia en la biología de tumores epiteliales.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO dsg3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DSG3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DSG3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DSG3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína dsg3.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DSG3 para la investigación de la señalización de dsg3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de DSG3 críticos para la función de dsg3
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DSG3 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido dsg3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido dsg3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DSG3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR dsg3 (h) y el plásmido HDR dsg3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DSG3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DSG3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.