Plasmide CRISPR d'Activation (h) dsg2: sc-400957-ACT

La desmogléine-2 (DSG2 ; dsg2) est une cadhérine desmosomale dépendante du calcium qui assure une forte adhésion cellule–cellule dans les tissus épithéliaux et au niveau des disques intercalaires cardiaques. En reliant les interactions de cadhérines extracellulaires à la plakoglobine/aux plakophilines cytoplasmiques et à la desmoplakine, DSG2 ancre les filaments intermédiaires et soutient l’intégrité des jonctions, la mécanotransduction et la fonction barrière. L’organisation des desmosomes dépendante de DSG2 s’articule avec des voies contrôlant la différenciation épithéliale, la migration cellulaire collective et les réponses au stress induit par les contraintes mécaniques. Une expression altérée de DSG2 ou un dysfonctionnement de cette protéine est associé au remodelage des desmosomes et a été étudié dans la cardiomyopathie arythmogène ainsi que dans la biologie des tumeurs épithéliales, où les modifications d’adhésion peuvent influencer l’architecture tissulaire et les états de signalisation.

dsg2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DSG2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

dsg2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DSG2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DSG2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de dsg2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DSG2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de dsg2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie dsg2 dans les cellules tumorales présentant une expression de DSG2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.