dsg1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401442

Descripción general

DSG1 codifica la desmogleína-1 (dsg1), una proteína de adhesión desmosómica de la familia de las cadherinas que refuerza las uniones célula–célula en epitelios estratificados y contribuye a la integridad de la barrera epidérmica. Al acoplarse a la plakoglobina, las plakofilinas y la desmoplaquina, DSG1 conecta la adhesión intercelular con las redes de filamentos intermedios y coordina la diferenciación, la resistencia mecánica y la morfogénesis tisular. La alteración del ensamblaje de desmosomas dependiente de DSG1 puede modificar la señalización de los queratinocitos, la remodelación de las uniones y las respuestas al estrés. La disfunción genética o adquirida de DSG1 se asocia con fragilidad cutánea y fenotipos inflamatorios, lo que la convierte en un objetivo relevante para estudiar la homeostasis epitelial y los mecanismos de enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO dsg1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DSG1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DSG1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DSG1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína dsg1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DSG1 para la investigación de la señalización de dsg1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DSG1 críticos para la función de dsg1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DSG1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido dsg1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido dsg1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DSG1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR dsg1 (h) y el plásmido HDR dsg1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DSG1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DSG1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.