Plasmide Double Nickase (h) DSCD75: sc-412188-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) DSCD75 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DSCD75 Double Nickase (h) et le plasmide DSCD75 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant THEM6. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: DSCD75 Antibody (A-8): sc-374256
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) DSCD75 | sc-412188-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) DSCD75 | sc-412188-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **THEM6** code **DSCD75**, une protéine transmembranaire associée au réticulum endoplasmique, impliquée dans les processus du métabolisme lipidique et le maintien de l’homéostasie membranaire. THEM6 a été associé à la régulation de la gestion des acides gras et du fonctionnement du RE, ce qui le relie à des voies coordonnant la biosynthèse des lipides, la composition des membranes des organites et les réponses cellulaires au stress. La perturbation de ces processus est pertinente pour des phénotypes impliquant une signalisation lipidique altérée et une adaptation métabolique, fréquemment étudiées dans des états cellulaires prolifératifs ou soumis au stress. Par conséquent, DSCD75 est souvent étudié dans le contexte du remodelage des réseaux RE–lipides et de ses effets en aval sur la physiologie cellulaire.
DSCD75 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus THEM6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de THEM6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de THEM6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de THEM6.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.