Plasmide CRISPR d'Activation (h) DSC2: sc-403386-ACT

Le gène humain **DSC2** code la desmocollin-2, une cadhérine desmosomale dépendante du calcium qui assure l’adhésion cellule–cellule et contribue à l’intégrité de la barrière épithéliale ainsi qu’au couplage mécanique entre cellules voisines. **DSC2** participe à l’assemblage et à la stabilisation des desmosomes via des interactions avec la plakoglobine, les plakophilines et la desmoplakine, reliant les complexes jonctionnels aux filaments intermédiaires et coordonnant l’architecture tissulaire lors de la différenciation et en condition de stress. Une expression altérée de **DSC2** ou un remodelage des desmosomes est associé à une adhérence perturbée, à des interactions croisées anormales entre voies de signalisation et à des modifications de la motilité cellulaire, pertinentes pour la pathobiologie épithéliale. Comme les desmosomes intègrent des fonctions structurales et de signalisation, **DSC2** est fréquemment étudié dans des modèles de dynamique des jonctions, d’organisation du cytosquelette et d’homéostasie tissulaire.

DSC2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DSC2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DSC2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DSC2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DSC2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DSC2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DSC2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DSC2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DSC2 dans les cellules tumorales présentant une expression de DSC2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.