Plásmido CRISPR de Activación (h) DR6: sc-402038-ACT

El gen humano **TNFRSF21** codifica el **receptor de muerte 6 (DR6)**, un miembro de la superfamilia de receptores de TNF que modula el desarrollo neuronal, la señalización inmunitaria y la apoptosis mediante vías mediadas por receptores. DR6 puede interactuar con proteínas adaptadoras para influir en la activación de caspasas y se integra con las vías de señalización **NF-κB** y **MAPK**, configurando programas transcripcionales sensibles a citocinas. En contextos neuronales, DR6 se ha vinculado con la poda axonal y la remodelación sináptica, mientras que en células inmunitarias contribuye a la regulación de la activación y la supervivencia celular. La desregulación de la señalización TNFRSF21/DR6 se ha asociado con fenotipos inflamatorios y se ha investigado en el contexto de mecanismos relacionados con la neurodegeneración y la oncología, lo que respalda su utilidad como nodo de vía para estudios funcionales.

DR6 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TNFRSF21 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DR6 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TNFRSF21 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TNFRSF21, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DR6. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TNFRSF21 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DR6 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DR6 en células tumorales con expresión de TNFRSF21 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.