Plásmido Doble Nickase (h) DR4: sc-400747-NIC

TNFRSF10A codifica el receptor de muerte 4 (DR4), un miembro de la superfamilia de receptores de TNF localizado en la superficie celular que se une a TRAIL e inicia la apoptosis extrínseca. Tras la unión del ligando, DR4 promueve el ensamblaje del complejo de señalización inductora de muerte y la activación de la caspasa-8, con comunicación posterior hacia la amplificación mitocondrial y respuestas de estrés asociadas a NF-κB. La señalización de DR4 se integra con vías que regulan decisiones sobre el destino celular, incluidas la apoptosis, la señalización inflamatoria y la vigilancia inmunitaria. La expresión alterada o la atenuación funcional de TNFRSF10A se ha estudiado en contextos de biología tumoral y resistencia a señales asociadas a la apoptosis, así como en una desregulación más amplia de las redes de señalización de receptores de muerte.

DR4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TNFRSF10A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TNFRSF10A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TNFRSF10A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TNFRSF10A alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.