DOM3Z Double Nickase Plasmid (h): sc-409469-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DOM3Z Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DOM3Z Double-Nickase-Plasmid (h) und DOM3Z Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DXO abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: DOM3Z: sc-393167
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DOM3Z Double Nickase Plasmid (h) | sc-409469-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DOM3Z Double Nickase Plasmid (h2) | sc-409469-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DXO (auch als DOM3Z bekannt) kodiert eine metallo-β-Lactamase-ähnliche RNA-Decapping- und Exonuklease, die zur zytoplasmatischen Qualitätskontrolle von RNA beiträgt. DOM3Z ist an Überwachungswegen beteiligt, die fehlerhaft gekappte oder unvollständig prozessierte RNAs entfernen und dadurch die mRNA-Stabilität mitgestalten sowie das Decapping mit dem 5′→3′-RNA-Abbau koppeln. Indem DXO den Umsatz defekter Transkripte und von Abbauintermediaten beeinflusst, trägt es dazu bei, die Integrität des Transkriptoms während zellulärer Stressantworten und der RNA-Prozessierung aufrechtzuerhalten. Eine Dysregulation von RNA-Abbau- und Überwachungsnetzwerken wird häufig mit veränderten Genexpressionsprogrammen in Krebs sowie in neurodegenerativen und entzündlichen Kontexten in Verbindung gebracht, was DXO zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien macht.
DOM3Z Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DXO-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DXO abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DXO-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DXO-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.