Plasmide CRISPR d'Activation (h) DOCK 5: sc-405073-ACT

DOCK5 code pour la « dedicator of cytokinesis 5 », un facteur d’échange de nucléotides guanyliques (GEF) atypique qui active préférentiellement les GTPases de la famille RAC afin de coordonner le remodelage du cytosquelette d’actine, l’étalement cellulaire et la migration dirigée. Par ses interactions avec des protéines adaptatrices au niveau des adhérences focales et des replis membranaires (ruffles), DOCK5 contribue à la signalisation dépendante des intégrines, à la formation de lamellipodes et à la régulation de la polarité cellulaire. Ces fonctions relient DOCK5 à des processus tels que le trafic des cellules immunitaires, la dynamique épithéliale et des programmes de motilité associés à l’invasion. Une signalisation DOCK5–RAC dérégulée a été étudiée dans le contexte d’un contrôle altéré du cytosquelette et de phénotypes métastatiques dans plusieurs modèles tumoraux, ainsi que de perturbations des réseaux de signalisation inflammatoire.

DOCK 5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DOCK5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DOCK 5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DOCK5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DOCK5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DOCK 5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DOCK5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DOCK 5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DOCK 5 dans les cellules tumorales présentant une expression de DOCK5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.