Dnmt3b Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420036-ACT

O Dnmt3b de camundongo codifica uma metiltransferase de DNA de novo que deposita 5-metilcitosina em dinucleotídeos CpG para estabelecer e manter o silenciamento epigenético durante o desenvolvimento embrionário e o comprometimento de linhagens. A DNMT3B coopera com a DNMT3A e com a metilação de manutenção mediada por UHRF1/DNMT1 para moldar o estado da cromatina, os programas de transcrição e a estabilidade genômica, incluindo a repressão de elementos transponíveis e a regulação do imprinting. Essa enzima se integra a vias de remodelamento de cromatina e de modificação de histonas, influenciando a dinâmica de metilação de promotores e enhancers ao longo da diferenciação e da reprogramação. Alterações na atividade de DNMT3B estão associadas a padrões aberrantes de metilação observados em distúrbios do desenvolvimento e na desregulação epigenética relacionada ao câncer, tornando-a um nó central para o estudo da regulação gênica dependente do epigenoma.

Dnmt3b O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Dnmt3b sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Dnmt3b O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Dnmt3b em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Dnmt3b, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Dnmt3b. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Dnmt3b nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Dnmt3b no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Dnmt3b em células tumorais com expressão de Dnmt3b silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.