Plasmide Double Nickase (m) Dnmt3a: sc-420035-NIC

La Dnmt3a murine code une ADN méthyltransférase de novo qui met en place les profils de méthylation des CpG au cours du développement précoce et de la spécification des lignages, façonnant des programmes d’expression génique stables et des états de la chromatine. DNMT3A agit au sein de réseaux de silençage épigénétique qui s’articulent avec les modifications des histones et l’occupation par des facteurs de transcription pour réguler la différenciation, l’empreinte génomique et la répression des transposons. La perturbation de Dnmt3a altère l’intégrité du méthylome et les décisions de destinée cellulaire, ce qui en fait un nœud clé pour l’étude de la mémoire épigénétique, de la biologie des cellules souches et de la régulation hématopoïétique. Une activité DNMT3A modifiée est largement utilisée comme point d’entrée mécanistique pour modéliser les dérégulations associées à la méthylation observées dans les cancers et les troubles du développement.

Dnmt3a Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Dnmt3a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Dnmt3a. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Dnmt3a. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Dnmt3a.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.