Plasmide Double Nickase (h) Dnmt3a: sc-400323-NIC

DNMT3A code Dnmt3a, une ADN méthyltransférase de novo qui met en place les profils de méthylation des CpG au cours du développement et de l'engagement du destin cellulaire, en modulant l'accessibilité de la chromatine et des programmes transcriptionnels à long terme. Dnmt3a coopère avec DNMT3B pour l'établissement de la méthylation et avec DNMT1 pour son maintien lors de la réplication de l'ADN, en s'intégrant à des voies de remodelage épigénétique qui influencent la stabilité du génome et le silençage des transposons. Une altération de la fonction de DNMT3A est associée à une différenciation hématopoïétique dérégulée et à une reprogrammation épigénomique étendue, et des variants somatiques récurrents sont fréquemment étudiés dans des modèles de malignités myéloïdes. En tant que régulateur central du contrôle des gènes dépendant de la méthylation, DNMT3A est couramment analysé en biologie des cellules souches, dans la maturation des cellules immunitaires et en recherche sur l'épigénétique du cancer.

Dnmt3a Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DNMT3A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DNMT3A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DNMT3A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DNMT3A.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.