Plásmido Doble Nickase (h) DNase II: sc-405046-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)DNase II consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa DNase II (h) y el plásmido de doble nickasa DNase II (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a DNASE2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) DNase II | sc-405046-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) DNase II | sc-405046-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El DNASE2 humano codifica la DNasa II, una endonucleasa ácida localizada principalmente en los lisosomas que cataliza la degradación del ADN dentro de fagolisosomas y autolisosomas. Esta actividad favorece la eliminación de ácidos nucleicos derivados de células apoptóticas y del ADN genómico procedente del material fagocitado, ayudando a mantener la homeostasis de los ácidos nucleicos durante la fagocitosis y la autofagia. Al limitar la persistencia de ADN intracelular, la DNasa II influye en las vías de detección inmunitaria innata vinculadas al reconocimiento de ácidos nucleicos y a la señalización inflamatoria subsiguiente. La disfunción de DNASE2 se ha asociado con una acumulación anómala de ADN y fenotipos de activación inmunitaria, lo que la hace relevante para estudios de inflamación, autoinmunidad y biología de macrófagos.
DNase II El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DNASE2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DNASE2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DNASE2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DNASE2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.