DNase I Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402467-ACT

O DNASE1 humano codifica a DNase I, uma endonuclease secretada que hidrolisa DNA extracelular e contribui para a depuração de ácidos nucleicos durante a renovação celular e o remodelamento tecidual. Ao degradar a cromatina liberada por células apoptóticas ou necróticas, a DNase I ajuda a limitar a persistência de DNA imunostimulatório capaz de acionar vias inatas de detecção de ácidos nucleicos e modular a sinalização inflamatória. A atividade do DNASE1 também é relevante para a renovação de armadilhas extracelulares de neutrófilos (NETs) e para a resolução de matrizes extracelulares ricas em DNA, conectando-o a processos como inflamação associada à trombose e homeostase de tecidos de barreira. Alterações na expressão ou na função do DNASE1 têm sido associadas à depuração desregulada de DNA e a fenótipos autoimunes, tornando-o um alvo útil para estudar mecanismos de tolerância ao DNA próprio e de patologia inflamatória.

DNase I O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DNASE1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DNase I O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DNASE1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DNASE1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DNase I. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DNASE1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DNase I no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DNase I em células tumorais com expressão de DNASE1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.