Plasmide CRISPR/Cas9 KO DnaJB3 (m): sc-420974

Présentation

Dnajb3 code DnaJB3, un membre de la famille des co‑chaperons Hsp40/DnaJ qui s’associe à Hsp70 pour réguler le repliement et le repliement correct des protéines, ainsi que le tri des polypeptides mal repliés. En stimulant, via son domaine J, l’activité ATPase de Hsp70, DnaJB3 contribue au maintien de la protéostasie cellulaire et soutient des voies de réponse au stress liées au contrôle de la qualité des protéines. Ces processus recoupent les réponses au stress du réticulum endoplasmique et les mécanismes d’élimination protéolytique qui influencent la survie cellulaire en conditions de stress protéotoxique. Un fonctionnement altéré du réseau de chaperons est largement pertinent dans des modèles de dysfonctionnement métabolique et de neurodégénérescence, où une protéostasie déficiente et une signalisation de stress perturbée contribuent à des phénotypes associés à la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DnaJB3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Dnajb3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Dnajb3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Dnajb3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DnaJB3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Dnajb3 pour l'étude de la signalisation de DnaJB3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Dnajb3 essentiels à la fonction de DnaJB3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Dnajb3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DnaJB3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le DnaJB3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Dnajb3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DnaJB3 plasmide HDR (m) et le DnaJB3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Dnajb3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Dnajb3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.