DNA pol γ2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407382

Visão geral

POLG2 codifica a subunidade 2 da DNA polimerase gama, um fator acessório que se liga à subunidade catalítica POLG para aumentar a processividade e sustentar a replicação e o reparo do DNA mitocondrial (mtDNA) com alta fidelidade. Essa proteína atua na biologia dos nucleoides mitocondriais e é essencial para manter o número de cópias do mtDNA, a integridade do genoma e a capacidade de fosforilação oxidativa. A perturbação das dinâmicas de replicação dependentes de POLG2 pode contribuir para a depleção de mtDNA ou para o acúmulo de deleções, associando a instabilidade do genoma mitocondrial a fenótipos de doenças mitocondriais neuromusculares e multissistêmicas. Por isso, POLG2 é amplamente estudado em vias que regulam a biogênese mitocondrial, as respostas ao estresse de replicação e a sinalização impulsionada pelo metabolismo.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO DNA pol γ2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene POLG2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do POLG2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do POLG2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína DNA pol γ2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de POLG2 para a investigação da sinalização de DNA pol γ2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) POLG2 críticos para a função DNA pol γ2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos POLG2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo DNA pol γ2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo DNA pol γ2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus POLG2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo DNA pol γ2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR DNA pol γ2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia POLG2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo POLG2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.