Plasmide CRISPR/Cas9 KO DNA pol γ2 (h): sc-407382

Présentation

POLG2 code la sous-unité 2 de l’ADN polymérase gamma, un facteur accessoire qui se lie à la sous-unité catalytique POLG afin d’améliorer la processivité et de soutenir la réplication et la réparation de l’ADN mitochondrial (ADNmt) avec une haute fidélité. Cette protéine intervient dans la biologie des nucléoïdes mitochondriaux et est essentielle au maintien du nombre de copies d’ADNmt, de l’intégrité du génome et de la capacité de phosphorylation oxydative. Une perturbation des dynamiques de réplication dépendantes de POLG2 peut contribuer à une déplétion de l’ADNmt ou à l’accumulation de délétions, reliant l’instabilité du génome mitochondrial à des phénotypes de maladies mitochondriales neuromusculaires et multisystémiques. POLG2 est donc largement étudié dans les voies qui régissent la biogenèse mitochondriale, les réponses au stress de réplication et la signalisation pilotée par le métabolisme.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DNA pol γ2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène POLG2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du POLG2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert POLG2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DNA pol γ2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en POLG2 pour l'étude de la signalisation de DNA pol γ2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de POLG2 essentiels à la fonction de DNA pol γ2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de POLG2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DNA pol γ2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DNA pol γ2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus POLG2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DNA pol γ2 plasmide HDR (h) et le DNA pol γ2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie POLG2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles POLG2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.