Plasmide Double Nickase (h) DNA-PK_CS: sc-400337-NIC

PRKDC code pour la sous-unité catalytique de la kinase protéique dépendante de l’ADN, DNA-PKCS, un régulateur central de la réparation des cassures double brin de l’ADN via la voie classique de jonction d’extrémités non homologues (c-NHEJ). Après la fixation de Ku70/Ku80 aux extrémités de l’ADN, DNA-PKCS est recrutée et activée afin de coordonner la mise en synapse des extrémités, leur maturation (processing) et leur ligation, et elle contribue également à la recombinaison V(D)J au cours du développement des lymphocytes. La signalisation de DNA-PKCS s’articule avec des réseaux de surveillance du génome, notamment les réponses aux dommages de l’ADN médiées par ATM/ATR, influençant le contrôle des points de contrôle du cycle cellulaire et la dynamique de la chromatine. Des altérations de la fonction ou de l’expression de PRKDC sont associées à une instabilité génomique accrue, à des phénotypes de radiosensibilité et à des dépendances de réparation de l’ADN liées au cancer, ce qui en fait une cible largement étudiée dans les mécanismes de stress génotoxique et de résistance.

DNA-PKCS Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PRKDC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PRKDC. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PRKDC. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PRKDC.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.