DMBT1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-402615-LAC

DMBT1 (Deleted in Malignant Brain Tumors 1) kodiert ein sezerniertes, cysteinreiches Glykoprotein aus der Familie der Scavenger-Rezeptoren, das an der epithelialen Differenzierung, der angeborenen Immunabwehr und der Homöostase der mukosalen Barriere beteiligt ist. Das DMBT1-Protein kann an vielfältige mikrobielle und endogene Liganden binden und unterstützt dadurch Agglutination, Mustererkennung sowie die Modulation entzündlicher Signalwege an Gewebeoberflächen. Es ist mit Prozessen wie Interaktionen mit der extrazellulären Matrix, Wundheilung und der Regulation von Zelladhäsion und -polarität verknüpft, wobei die Effekte auf epitheliale Wachstumsprogramme kontextabhängig sind. Eine veränderte DMBT1-Expression oder Störungen am DMBT1-Lokus wurden bei mehreren epithelialen Krebsarten und entzündlichen Erkrankungen beschrieben, was DMBT1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Wirt–Mikroben-Schnittstellen und epithelialen Stressantworten macht.

DMBT1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente DMBT1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

DMBT1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der DMBT1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen DMBT1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen DMBT1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.