Plasmide Double Nickase (h) DLD: sc-403207-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) DLD correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DLD Double Nickase (h) et le plasmide DLD Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant DLD. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: DLD Antibody (G-2): sc-365977
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) DLD | sc-403207-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) DLD | sc-403207-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DLD code la dihydrolipoamide déshydrogénase (E3), une oxydoréductase flavino‑dépendante qui réoxyde la dihydrolipoamide en lipoamide tout en réduisant le NAD+ en NADH. En tant que sous-unité E3 commune, DLD soutient le métabolisme énergétique mitochondrial via les complexes pyruvate déshydrogénase, α‑cétoglutarate déshydrogénase et déshydrogénase des α‑cétoacides à chaîne ramifiée, reliant la glycolyse et le catabolisme des acides aminés au cycle de l’acide citrique (TCA) et à la phosphorylation oxydative. Une altération de DLD perturbe l’homéostasie redox et la fonction mitochondriale, en modifiant l’équilibre NADH/NAD+ et la gestion des espèces réactives de l’oxygène. Les variations génétiques de DLD sont associées à des erreurs innées du métabolisme caractérisées par une altération du métabolisme oxydatif et une acidémie lactique, et une dérégulation de l’énergétique mitochondriale est pertinente pour la recherche sur la neurodégénérescence et la bioénergétique du cancer.
DLD Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DLD dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DLD. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DLD. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DLD.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.