Plásmido CRISPR de Activación (h) DIP2C: sc-411642-ACT

La DIP2C humana (proteína 2 homóloga C que interactúa con disco) es una proteína asociada al núcleo implicada en la regulación de la expresión génica vinculada a la cromatina y en el mantenimiento de los programas de identidad celular. Las funciones descritas relacionan a los miembros de la familia DIP2 con el control epigenético, procesos asociados a la metilación del ADN y redes transcripcionales vinculadas a la diferenciación que moldean la proliferación y el compromiso de linaje. Se han observado alteraciones en la expresión de DIP2C y cambios en el número de copias en múltiples contextos tumorales, lo que respalda su relevancia en estados transcripcionales desregulados y en la remodelación regulatoria a escala genómica. Estas características convierten a DIP2C en un objetivo útil para estudiar el control transcripcional, las transiciones de estado celular y los circuitos reguladores relevantes para el cáncer en células humanas.

DIP2C El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DIP2C sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DIP2C El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DIP2C en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DIP2C, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DIP2C. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DIP2C y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DIP2C en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DIP2C en células tumorales con expresión de DIP2C silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.